懸(xuan)浮(fu)(fu)細胞(bao)(bao)總是在孵抗體和洗的時(shi)候被(bei)沖掉(diao)，懸(xuan)浮(fu)(fu)細胞(bao)(bao)做免疫熒(ying)光(guang)怎么固(gu)定？

傳統方法

實驗步驟：

1. 細胞(bao)在冰浴中冷卻，然后用臺(tai)式離(li)心(xin)(xin)機于4℃以800 g 離(li)心(xin)(xin)5 min，吸去培(pei)養液并以4℃PBS重懸細胞(bao)。

2. 離心吸去PBS，以1~2 ml 2%PFA固定液，或2%PFA固定液/0.1% Triton X-100重懸細胞，置冰(bing)上(shang)固定30 min。

3. 離心、吸去固定液(ye)，用(yong)15 ml 4℃ PBS重懸(xuan)細胞(bao)，放(fang)5 min 后，用(yong)PBS再次洗(xi)滌細胞(bao)。

4. 稀釋的第(di)一抗體于4℃用微量離心機以13 500 g 離心2 min，250 μl 抗體足夠(gou)用于5x106細胞。

5. 離(li)心(xin)細(xi)胞，吸去PBS，重懸細(xi)胞于(yu)第一抗體中，置4℃溫育1 h。

6. 用(yong)4℃ PBS稀釋細胞(bao)和抗體至15 ml。

7. 離心，吸(xi)去(qu)PBS，以4℃ PBS重(zhong)懸細胞，重(zhong)復1次。

8. 第二抗體4℃用微量離心機以13 500 g 離心2 min，5x106細胞用250 ul 抗體足夠(gou)。

9. 吸去(qu)PBS，以(yi)第二抗(kang)體(ti)重懸(xuan)細胞，4℃溫育1 h，重復(fu)步驟6及步驟7。

10. 除非立(li)即觀察細(xi)胞，否(fou)則在進行細(xi)胞濃縮(suo)的下(xia)一步操作之前應以(yi)鋁萡包裹離心管并冷藏。

11. 離心細胞(bao)并以少(shao)量PBS重懸(xuan)（勿(wu)用水），將細胞(bao)懸(xuan)液滴于多聚-L-賴氨酸覆(fu)層(ceng)的(de)載玻片(pian)上(shang)，加上(shang)蓋玻片(pian)，盡(jin)可能(neng)馬上(shang)觀察結果。 

鏡(jing)下觀察：沒有細(xi)胞，原來(lai)掉片了！！！

靶點科技Shi-Fix懸浮細胞固定免疫熒光專用玻片，帶來痛點解決方案。像貼壁細胞一樣處理懸浮細胞，好簡單啊，就四步！