細胞(bao)(bao)培養類(lei)型可以分為(wei)貼壁細胞(bao)(bao)和懸浮細胞(bao)(bao)兩種(zhong)，只(zhi)有極(ji)少數類(lei)型細胞(bao)(bao)同時(shi)存在兩種(zhong)狀態。
懸浮細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)是(shi)指不(bu)需要(yao)依(yi)賴支持物，可(ke)在培(pei)(pei)養(yang)(yang)基中(zhong)(zhong)(zhong)以懸浮狀態生長(chang)的(de)一類細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，如(ru)淋巴(ba)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)和(he)大(da)部分血液系統來源細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)。（如(ru)小鼠白(bai)血病(bing)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)WEHI-3, 人白(bai)血病(bing)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)K-562, HL-60）。工(gong)業上(shang)也有(you)越來越多的(de)貼壁傳代細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)被馴(xun)化出來，進行全(quan)懸浮的(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)。目前在工(gong)業中(zhong)(zhong)(zhong)應用(yong)的(de)主要(yao)有(you)SP2/0、NS0、CHO、BHK和(he)HEK293細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)等(deng)，它們主要(yao)用(yong)于(yu)重組蛋白(bai)質生產；在獸用(yong)生物制(zhi)品中(zhong)(zhong)(zhong)常用(yong)的(de)傳代細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)主要(yao)有(you)采(cai)用(yong)全(quan)懸浮培(pei)(pei)養(yang)(yang)的(de)BHK21細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)、MDCK細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)；及借助微(wei)載體懸浮培(pei)(pei)養(yang)(yang)的(de)Vero細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)、PK細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)、ST細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)、 Marc145細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)等(deng)，每種細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)特性都(dou)不(bu)同(tong)。
一般情況下，懸浮細(xi)(xi)(xi)胞(bao)相較于貼壁(bi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)處理更(geng)加(jia)簡(jian)單(dan)一些(xie)，因為(wei)懸浮細(xi)(xi)(xi)胞(bao)傳代時無(wu)須(xu)胰酶消(xiao)化(hua)(hua)。但這并(bing)不意味著(zhu)懸浮細(xi)(xi)(xi)胞(bao)比(bi)貼壁(bi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)好養，對新手(shou)來說(shuo)，反而(er)更(geng)具挑戰性(xing)。總是會(hui)遇到各種(zhong)各樣的(de)問題(ti)：比(bi)如，為(wei)什么總是出(chu)現死細(xi)(xi)(xi)胞(bao)和(he)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)分(fen)化(hua)(hua)；說(shuo)好了(le)(le)傳代很(hen)easy的(de)，結果會(hui)出(chu)現分(fen)化(hua)(hua)；養好了(le)(le)凍存(cun)復蘇后又出(chu)現問題(ti)了(le)(le)！
養好懸浮細胞(bao)，有如下大眾經驗分享。
要點一：足夠的耐心，這是非常必要的
很(hen)多懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)在(zai)(zai)剛從凍(dong)存(cun)狀(zhuang)態(tai)復(fu)蘇時(shi)活力是相對較(jiao)差(cha)的(de)，此(ci)時(shi)我(wo)們需(xu)要(yao)有足夠的(de)耐心，等待(dai)細(xi)胞(bao)完(wan)成自我(wo)修復(fu)進入對數增(zeng)長期(qi)(qi)。比如THP-1（人單核細(xi)胞(bao)白血病）從解凍(dong)到(dao)恢(hui)復(fu)正常增(zeng)殖(zhi)往(wang)往(wang)需(xu)要(yao)7-10天的(de)恢(hui)復(fu)期(qi)(qi)；Jurkat，Clone E6-1(人T淋巴細(xi)胞(bao)白血病細(xi)胞(bao))復(fu)蘇后也需(xu)要(yao)5-7天才(cai)能恢(hui)復(fu)到(dao)凍(dong)存(cun)前的(de)狀(zhuang)態(tai)。新手可能會在(zai)(zai)此(ci)期(qi)(qi)間放棄培(pei)養，所以，請多一(yi)點耐心哦！培(pei)養這類(lei)細(xi)胞(bao)也是培(pei)養耐心的(de)過程呢(ni)！
要點二：接種密度的把握
一般(ban)來(lai)說，懸浮細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)接種時(shi)密(mi)度不應低于(yu)50萬個/ML，很多懸浮細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)有密(mi)度依(yi)賴，密(mi)度低導致的不增殖也(ye)是新手常(chang)見(jian)問題之一。當然，有極少數細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)在(zai)密(mi)度高(gao)時(shi)反(fan)而(er)狀(zhuang)態變差，如W6/32（小鼠B細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)雜交瘤細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)）。因此，培(pei)養不了解(jie)的細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)前查找(zhao)相關資料去(qu)掌握細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)特性(xing)非常(chang)重要。
要點三：換液方法及頻率
換液(ye)(ye)頻率不(bu)應該(gai)被限制得“明(ming)明(ming)白(bai)白(bai)"，細(xi)(xi)胞是(shi)活(huo)(huo)物，在一個(ge)連續培(pei)養(yang)周期(qi)內(nei)，視細(xi)(xi)胞生(sheng)長(chang)狀態可分多(duo)次添(tian)加補充培(pei)養(yang)基、葡(pu)萄糖等特定營養(yang)成份，維持細(xi)(xi)胞良好的生(sheng)長(chang)狀態。懸浮(fu)培(pei)養(yang)過(guo)程中(zhong)，隨著細(xi)(xi)胞的增殖，原(yuan)有培(pei)養(yang)基中(zhong)營養(yang)物質的消耗，代謝產(chan)物的增加，細(xi)(xi)胞的活(huo)(huo)率會下降，及時補充營養(yang)物質，使(shi)細(xi)(xi)胞處于一個(ge)相對良好的生(sheng)存環(huan)境。切忌頻繁離心換液(ye)(ye)。參考(kao)換液(ye)(ye)方法：
①離心全(quan)換液法
即通過離心(xin)（800-1000rpm，5min）去除(chu)全部(bu)舊的培(pei)(pei)養基(ji)(ji)，更換(huan)新鮮培(pei)(pei)養基(ji)(ji)。該方法(fa)適合“皮實“好(hao)養的懸浮細胞(bao)(bao)換(huan)液(如(ru)K562)，或(huo)者當前(qian)細胞(bao)(bao)狀態良(liang)好(hao)、密(mi)度(du)較高導致培(pei)(pei)養基(ji)(ji)消耗較大的情(qing)況。此方法(fa)的優點是換(huan)液到位，能去除(chu)部(bu)分細胞(bao)(bao)碎片(pian)，但是同樣會(hui)對細胞(bao)(bao)造(zao)成一(yi)定程度(du)的機(ji)械損(sun)傷。
②離(li)心半換液法
即通過離心（800-1000rpm，5min）50%細胞懸液，更換(huan)50%體積的新鮮培養基(ji)。該(gai)方法適合比(bi)較(jiao)“矯情(qing)“難養的細胞（如thp-1），或者正在調整狀態(tai)中、密度較(jiao)低但碎(sui)片(pian)較(jiao)多需要去除(chu)的情(qing)況。
③沉(chen)降(jiang)換液法
即(ji)不使用離(li)心機而是利用重力自(zi)然(ran)(ran)沉降(jiang)的(de)方法，將培養(yang)基與細(xi)(xi)胞(bao)分離(li)，達到全部(bu)或(huo)部(bu)分更換新(xin)鮮培養(yang)基。但(dan)是其有(you)應用局限(xian)性—只適合能成一定大(da)小細(xi)(xi)胞(bao)團（否則無法自(zi)然(ran)(ran)沉降(jiang)，只能低(di)速離(li)心）的(de)細(xi)(xi)胞(bao)，尤其是處理依賴(lai)細(xi)(xi)胞(bao)聚集才能增殖的(de)細(xi)(xi)胞(bao)時非(fei)常值得推薦，如(ru)NK-92、NK-92 MI、Jurkat。該(gai)方法能在換液過程(cheng)中最大(da)限(xian)度避免離(li)心過程(cheng)造(zao)成的(de)機械損傷，同時保(bao)留(liu)聚集的(de)細(xi)(xi)胞(bao)團，并且(qie)去除細(xi)(xi)胞(bao)碎片(pian)也(ye)較為(wei)干凈。
固定懸浮細胞，有如下私房經驗分享。
養好懸浮細胞，需要用化合物等試劑刺激懸浮細胞，或者共培養。使用免疫熒光來檢查懸浮細胞，一直給很多新手，甚至高手造成心理陰影。如何固定好懸浮細胞？如何確保不掉片？甚至如何讓懸浮細胞貼壁來做實驗？是很多實驗者的奢望。懸浮細胞固定/免疫熒光專用玻片給帶來解決方案。
如下是一些懸浮(fu)細胞固定后做的免(mian)疫熒(ying)光圖(tu)片，可(ke)以參考(kao)。
