根據細胞培養時是否附著在支持介質上，分為貼壁細胞和懸浮細胞。

貼壁細(xi)胞天(tian)生容易貼(tie)壁(bi)，這為后續實驗提供(gong)了便利(li)條(tiao)件。

但是懸浮細胞在培養基中懸浮生長，如何像貼壁細胞一樣好操作，一直是大家的夢想。

一 傳(chuan)統的方法(fa)：細胞準備與固定

（1）單層生長(chang)細胞(bao)(bao)：取對數(shu)生長(chang)細胞(bao)(bao)，用0.25％胰蛋白酶(mei)消化(hua)，制成單細(xi)胞懸(xuan)液。將細(xi)胞接種到(dao)預先放(fang)置幾張6×22mm蓋玻片的培養瓶或培(pei)養皿中，置(zhi)二氧化碳培(pei)養箱培(pei)養1-3天，待(dai)細胞接近長成單(dan)層，取出蓋玻片，進入PBS（0.01 mol/L,pH7.4）洗2次(ci)，然后根據實驗目(mu)的(de)，選擇適當固(gu)(gu)(gu)定劑固(gu)(gu)(gu)定細胞。常用固(gu)(gu)(gu)定劑有：95％乙醇（固(gu)(gu)(gu)定時間10-30min），丙(bing)酮（5－10min）等。

（2) 懸浮生長細胞：取(qu)對數生長細胞，用PBS離心(xin)洗滌（1000rpm，5min）2次，或(huo)(huo)用細胞離心(xin)甩片(pian)機(ji)制(zhi)備細胞片(pian)或(huo)(huo)直接制(zhi)備細胞涂片(pian)，把細胞片(pian)浸(jin)入95％乙醇或(huo)(huo)丙酮(tong)中(zhong)固(gu)定。

2 將已經固定的細胞玻片(pian)放(fang)入蓋片(pian)染色缸，用(yong)PBS振洗5min，取出吹干。

3 滴加(jia)適當稀(xi)釋的特異性抗體，置于濕(shi)盒(he)內，37度保溫(wen)30－60min或度冰箱過夜

4 PBS振洗3次，每次5min，吹干。

5 滴加適(shi)當(dang)稀(xi)釋的(de)熒光素(su)標記(ji)抗體，置于濕盒(he)內，37度保溫30－60min。

6 PBS振(zhen)洗2次(ci)，每(mei)次(ci)5min，然后用(yong)蒸餾水振(zhen)洗1次(ci)。

7 50％緩(huan)沖甘油封片(pian)。

二 Shi-Fix玻片最新方法(fa)

Shi-Fix玻片，可以讓我們像貼(tie)壁細胞(bao)一樣對(dui)懸(xuan)浮細胞(bao)做免疫(yi)熒光，如下是(shi)使用(yong)Shi-Fix做的實驗結果。簡單的四(si)部(bu)，告(gao)別(bie)傳統的自己(ji)涂片，自己(ji)甩(shuai)片，自己(ji)烤片等作坊(fang)式方(fang)法。